Внедрение новых методов серологической диагностики бруцеллёза животных

В ветеринарии считается достоверным мнение о том, что профилактика бруцеллеза и ликвидация его эпизоотических очагов должна базироваться на своевременной диагностике, которая до сих пор значительно затруднена из-за многообразия форм и недостаточной специфичности ее проявления.

Распознавание источника возбудителя бруцеллезной инфекции — весьма важный аспект действенности эпизоотологического контроля путем полной и безошибочной диагностики, в т.ч. и его скрытых форм.

В настоящее время диагностика, в том числе и скрининг, бруцеллеза в Волгоградской области основывается на показаниях комплекса методов исследований: клинико-эпизоотологического, бактериологического, серологического, аллергического и молекулярно-генетического.

Клиническая картина и эпизоотологический диагноз, как предварительное обследование, должны быть подтверждены хотя бы одному из лабораторных методов исследования.

На бактериологическую диагностику, основанную на обнаружении бактериоскопией бруцелл в мазках из патологического материала, выделении культуры на питательных средах или путём постановки биологической пробы, влияют слишком много объективных и субъективных факторов (количество и правильность направленного материала, время на его доставку в лабораторию, наличие качественных питательных сред и т.д.).

Для проведения молекулярно – генетического исследования (ПЦР) на бруцеллёз необходимо дорогостоящее оборудование и расходные материалы, что не даёт возможности применять его в районных лабораториях.

В борьбе с бруцеллёзом сельскохозяйственных животных имеет большое значение ранняя диагностика заболевания. Чем быстрее будут выявлены больные животные, тем раньше можно принять меры по ликвидации заболевания.

Серологическая диагностика бруцеллёза остаётся самой распространённой в ветеринарной практике, а серологические и иммуноферментный методы отвечают этому требованию более удовлетворительно по сравнению с другими методами.

Бруцеллёзная инфекция протекает своеобразно не только у разных видов животных, но почти и у каждого в отдельности взятого животного (в зависимости от возраста, пола, физиологического состояния, вирулентности возбудителя, времени с момента инфицирования и т. д.), а поэтому динамика титров антител в процессе инфекции (образование, сохранение, нарастание, спад титра антител) у всех разная.

Диагноз на бруцеллёз по реакции агглютинации и реакции связывания комплемента с единым бруцеллёзным антигеном и другим реакциям, основанным на выявлении антител в крови, может быть установлен в близкие и отдалённые сроки после заражения животного бруцеллёзом, а применение двух, трёх или большего количества реакций позволяет распознаванию болезни у большего количества животных.

В продолжение всей истории борьбы с бруцеллёзом животных серологические методы диагностики заболевания находятся в состоянии совершенствования старых методов и разработки новых.

За последние 20 лет специалисты серологического отдела Волгоградской областной ветеринарной лаборатории принимали участие по программе испытаний в производственных условиях нескольких диагностикумов:

тест-системы для диагностики бруцеллёза крупного и мелкого рогатого скота и северных оленей в РИД;
набора компонентов для диагностики бруцеллёза крупного и мелкого рогатого скота в реакции непрямой гемагглютинации;
набора для выявления антител к иерсиниям и бруцеллам в сыворотках крови крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа;
набора для диагностики бруцеллёза крупного рогатого скота иммуноферментным методом;
антигена иерсиниозного 09-S, предназначенного для выявления антител к Yersinia enterocolitika серовара 09 S – формы в реакции агглютинации с сыворотками крови крупного рогатого скота;
набора для диагностики бруцеллёза собак, вызываемого B. canis, в реакции агглютинации;
тест-системы для диагностики бруцеллёза собак, вызываемого B. canis, в реакции иммунодиффузии в агаровом геле.

Все перечисленные методы достаточно специфичны, имеют высокую чувствительность, по некоторым из них возможен инструментальный учёт результатов анализа, исключающий субъективизм оценки. Большинство из них утверждены и применяются при плановых исследованиях и дифференциации неспецифических реакций.

Но наиболее интересным, с точки зрения практического диагностики, нам представляется определение антител к ЛПС антигену B. abortus и B. melitensis в сыворотке крови крупного рогатого скота и овец с помощью иммунохроматографической тест – системы. Определение основано на принципе иммунохроматографического анализа, при котором анализируемый образец сыворотки крови или молока абсорбируется поглощающим участком тест-полоски. Для исследования этим методом требуется только два компонента: анализируемый образец сыворотки крови (разводится буфером) и иммунохромотографическая тест-полоска, а результат реакции определяется визуально в течение 15 минут.

В период с 18.04.2011 г. по 13.02.2012 г. была проведена апробация тест- системы с использованием образцов сыворотки крови крупного рогатого скота из хозяйств области с разным эпизоотическим статусом по бруцеллёзу.

Серологическое исследование проб сыворотки крови от крупного рогатого скота с использованием тест – системы проводили в соответствии с инструкцией по её применению, предоставленной разработчиками (ООО «Новые технологии» г. Курск), параллельно с плановым исследованием этих проб с помощью диагностических средств и методов, зарегистрированных и предписанных для применения в РФ.

Результаты апробации иммунохроматографической тест-системы для определения антител к антигенам B.abortus и B.melitensis в сыворотке крови крупного рогатого скота — Таблица 1

Исследовано проб сыворотки крови	Результат исследования
Исследовано проб сыворотки крови	РА 1/50- 1/12800 МЕ, мл	РСК 1/5- 1/10	РНГА 1/50-1/12800	РБП	РИД	ИХА
всего	104	104	75	104	104	104
пол.	20	39	24	32	35	43
сомн.	20	3	8	0	0	11
пол.+сом.	39	42	32	32	35	54
отр.	64	62	43	72	69	50
сумма пол. и сомн. результатов исследований, %	37,5	40,4	42,7	31,1	33,7	52,0

Согласно табличным данным при исследовании животных из хозяйств с разной эпизоотической ситуацией по бруцеллёзу было выявлено проб сыворотки крови положительно и сомнительно реагирующих на бруцеллёз: в РА – 37,5%, в РСК – 40,4%, в РНГА 42,7%, в РБП – 31,1%, в РИД – 33,7% и в ИМХМ – 52,0%.

Анализируя методику постановки реакции и результаты исследований можно сделать вывод, что иммунохромотографическая реакция, в сравнении с другими серологическими методами, обладает следующими преимуществами: быстрота проведения анализа, высокая чувствительность, простота проведения реакции, возможность использования в любых условиях (без специального оборудования, приборов и с минимумом лабораторной посуды) и, как следствие, экономическая выгода.